Тест для обнаружения антигенов ротавируса (фекалии) Ecotest

• Назначение

Тест для обнаружения антигенов ротавируса – это быстрый визуальный иммунохроматографический тест для качественного предварительного определения ротавируса в образцах кала человека. Этот комплект предназначен в качестве вспомогательного средства для использования в диагностике инфекций, вызванных ротавирусом.

Краткое описание

Ротавирус – самый распространенный вирусный агент, отвечающий за острый гастроэнтерит, главным образом у маленьких детей. Его открытие в 1973 году и установление связи с инфантильным гастроэнтеритом представляли очень важное значение в изучении гастроэнтерита, не вызванного острой бактериальной инфекцией. Ротавирус передается орофекальным путем с инкубационным периодом 1-3 дня. Идеально подходят для обнаружения антигенов ротавируса образцы, взятые в течение третьего и пятого дня болезни. Ротавирус все же можно найти, пока диарея продолжается. Ротавирусный гастроэнтерит может привести к смертности для групп риска, таких как младенцы, пожилые люди и иммуноскомпрометированные пациенты. В умеренном климате ротавирусные инфекции встречаются преимущественно в зимние месяцы. Сообщалось об эндемиках, а также об эпидемиях, затрагивающих около тысячи человек. У госпитализированных детей, страдающих острыми заболеваниями желудка, до 50% анализируемого образца были положительными относительно ротавируса. Вирусы размножаются в ядре клетки и, как правило, являются специфическими видами хозяев, производящих характерный цитопатический эффект.

Сбор и хранение образцов

• Для достижения наилучших результатов, следует производить сбор образцов при ранних симптомах. Если образцы были собраны спустя длительное время после возникновения симптомов диареи, количество антигена может быть недостаточным для получения положительной реакции или обнаружение антигенов может быть не связано с диареей. Максимальное выведение ротавируса с калом у пациентов с гастроэнтеритом происходит через 3-5 дней после появления симптомов.
• Тест следует проводить непосредственно после сбора образца. Не оставлять образцы при комнатной температуре длительно. Образцы хранить при температуре от 2°C до 8°C в течение 72 часов. При необходимости более продолжительного хранения образцов температура не должна превышать -20°C.
• Перед исследованием доведите образцы до комнатной температуры.
• Образцы следует упаковать в соответствии с действительными требованиями транспортировки этиологических агентов, если они транспортируются.

Процедура проведения анализа

Перед использованием тесты, образцы, буфер и/или контрольные образцы довести до комнатной температуры (15°C - 30°C).

А. Сбор и предварительная обработка образцов:

1. Соблюдайте порядок работы, указанный в настоящей инструкции. Для достижения наилучших результатов тест следует проводить в течение 2 часов после сбора образца. Осторожно открутите крышечку пробирки с аппликатором.
2. Для жестких образцов: Осторожно открутить крышечку пробирки с аппликатором (пипеткой), следя за тем, чтобы не разлить и не разбрызгать раствор из пробирки. Выполнить забор образца с помощью аппликатора (пипетки), погрузив его в по меньшей мере в 3 произвольных места образца кала для получения примерно 50 мг (mg) фекалий (эквивалентно 1/4 горошины).
3. Для жидких образцов: Держа аппликатор (пипетку), вертикально отобрать образец фекалий и перенести 2 капли жидкого образца в пробирку для разведения образца с буфером.
4. Поместить аппликатор (пипетку) в пробирку и плотно закрутить крышку, следя за тем, чтобы не отломить кончик пробирки.
5. Активно потрясите пробирку, чтобы смешать образец с буфером для экстракции. Образцы, подготовленные в пробирке, можно хранить в течение 6 месяцев при -20°C, если тест не был проведен в течение часа после подготовки.

Б. Проведение теста

1. Вытащить тест из саше и поместить на чистую, ровную поверхность. Для достижения наилучших результатов тест следует провести в течение часа.
2. Открутите пробирку с образцом с другой стороны и, обмотав салфеткой, отломите кончик пробирки. Держать пробирку вертикально, внести 2 капли раствора в отверстие для образцов на тест-кассете. Избегать формирования пузырьков в отверстии для образцов и не наносить раствор на область результатов. Когда тест заработает, мембрана начнет окрашиваться.
3. Дождаться появления цветной полосы. Оцените результат теста через 10 минут. Не интерпретировать результаты, полученные позже чем через 20 минут.
4. Если образец не мигрирует (наличие частиц), следует центрифугировать экстрагированные образцы, содержащиеся во флаконе с экстракционным буфером, затем собрать 80 мкл (μl) супернатанта, внести в отверстие для образцов новой тест-кассеты и провести тест еще раз, следуя указанным выше инструкции.

Интерпретация результатов

• Позитивный: Две окрашенные полоски на мембране. Одна полоска появляется в контрольной зоне (C), а вторая – в тестовой зоне (T).
• Негативный: только одна окрашенная полоска в контрольной зоне (C). В тестовой зоне (T) не появляется видимая окрашенная полоска.
• Недействителен: Отсутствие окрашенной полоски в контрольной зоне (C). Результаты тестов, которые не дали окраску полоски в контрольной зоне, неследует учитывать. Пересмотрите порядок работы и повторите тест с новой кассетой.

Примечание:

• Интенсивность окраски в тестовой зоне (T) может отличаться в зависимости от концентрации аналитов, имеющихся в образце. Поэтому появление полоски какой-либо интенсивности окраски в тестовой зоне должно считаться положительным результатом. Обратите внимание, что тест только качественный и не предназначен для определения концентрации аналитов в образце.
• Основными причинами получения недействительного результата могут быть недостаточный объем образца, несоблюдение процедуры тестирования или использование тестов по истечении срока годности.

Ограничение теста:

• Тест обнаружения антигенов ротавируса предназначен для профессионального диагностического использования in vitro.
• Тест для обнаружения антигенов ротавируса в кале предназначен для использования только с образцами кала человека.
• Как и с другими диагностическими тестами, окончательный клинический диагноз не должен базироваться на результатах одного теста, а должен быть поставлен врачом только после оценки всех клинических и лабораторных результатов.
• Если результат тестирования отрицательный и клинические симптомы сохраняются, рекомендуется провести дополнительное тестирование с использованием других клинических методов. Отрицательный результат не исключает заражения ротавирусом с низкой концентрацией вирусных частиц.

Условия хранения:

• Хранить при температуре от 2°C до 30°C в закрытой упаковке до истечения срока годности.
• Тест должен храниться в герметично закрытом саше до использования.
• Не замораживать.
• Компоненты комплекта должны быть защищены от загрязнения. Не использовать при наличии признаков микробного загрязнения или осадка. Биологическое загрязнение дозаторов, контейнеров или реагентов может привести к ошибочным результатам.
• Хранить в защищенном от солнечного света месте, воздействии влаги и высокой температуре.
• Используйте тест при влажности от 20 до 90% и температуре от 10°C до 30°C.
• Срок годности теста составляет 24 месяца со дня изготовления.

Комплектация:

1. Один тест в одной упаковке. Одна упаковка содержит тест-кассету, поглотитель влаги. Поглотитель влаги предназначен для хранения набора и не используется при проведении теста.
2. Пробирка с аппликатором (пипеткой) для забора образца и буферным раствором для его разведения.
3. Инструкция.

Меры предосторожности:

• Только для диагностики in vitro.
• Не использовать по истечении срока годности, указанного на упаковке. Не использовать тест, если саше повреждено. Не использовать повторно.
• Не проглатывать и не вдыхать компоненты теста.
• Не допускать перекрестного микробиологического загрязнения образцов использовать для каждого из них отдельный контейнер для сбора образцов.
• Прежде чем провести анализ, внимательно прочесть инструкцию.
• Не употреблять пищу, напитки и не курить в месте обработки образцов и комплектов. Обращаться с образцами, учитывая, что они могут содержать возбудители инфекции. Соблюдать определенные меры предосторожности в отношении микробиологических рисков на протяжении всей процедуры, а также соблюдать стандартные процедуры надлежащей утилизации образцов. Носить защитную одежду, например, лабораторные халаты, одноразовые перчатки и средства защиты глаз при исследовании образцов.
• Буфер для разбавления образца содержит азид натрия, который может вступать в реакцию со свинцовыми или медными трубами, формируя азиды металлов. При утилизации буфера для разведения образца или извлеченных образцов всегда сливать большое количество воды, чтобы предотвращать формирование азидов.
• Не заменять и не смешивать реагенты из разных партий.
• Влажность и температура могут оказать негативное влияние на результаты.
• Использованные исследованные материалы утилизировать в соответствии с санитарно-противоэпидемическими правилами и нормами по обращению с медицинскими отходами.

Принцип действия

Тест для обнаружения антигенов ротавируса (кал) – тестовое устройство для обнаружения ротавируса с помощью визуальной интерпретации изменения цвета в тестовой зоне (Т). Антиротавирусные антитела иммобилизуются на мембране в тестовой зоне (Т). При тестировании экстрагированные антигены, при их наличии, связываются с антиротавирусными антителами, конъюгированными с окрашенными частицами на пластинке с образцом. По мере того, как образец движется по мембране вверх под влиянием капиллярных сил, и взаимодействует с реагентами на мембране, конъюгированный комплекс будет увлекаться антиротавирусными антителами в тестовой зоне. Излишки окрашенных частиц фиксируются на внутренней контрольной зоне. Наличие одной окрашенной полоски в тестовой зоне (Т) указывает на положительный результат для специфических антигенов вирусных, тогда как ее отсутствие указывает на отрицательный результат. Цветная полоска в контрольной зоне (С) каждой тестовой линии служит контролем действительности теста.